MTT assay

MTT Assay

1) MTT assay원리

Tetrazolium-based colorimetric (MTT) 시험법은 많은 시료를 쉽게 빠르게 판독 할 수 있어 배양된 세포에서 세포 독성에 관한 연구에 주로 사용된 방법이다. 이 방법은 대사 과정이 온전한 세포의 미토콘드리아 내의 탈수소효소가 노란색 수용 성 tetrazoliumsalt[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT)를 비수용성의 짙은 자주색 MTT formazan 결정으로 환원시키는 원리를 이용한 것으로 적절한 파장 (주로 500 ~ 600nm)에서 흡광도를 측정하여 세포독 성을 평가할 수 있다.1),2)

                                                                                 http://en.wikipedia.org/wiki/MTT_assay

                                                         그림 1. MTT 원리

2) 실험재료 및 방법

① 실험재료

- PBS

- MTT 용액: MTT 2 ~ 5mg/ml로 PBS에 녹인 뒤, 필터 하여 tube에 담아 빛 차단 후 4℃보관

- DMSO

- 96well plate (flat bottom)

  ② 실험방법

- 96well plate에 각 well 당 1 × 104 ~ 1 × 106으로 세포를 분주한다.

- 측정하고자 하는 물질을 농도별로 각 well에 첨가한다.

- 시험물질이 충분히 노출될 수 있도록 적절한 시간동안 37℃, 5%, CO2 incubator에 배양한다.

- 상층액을 다른 실험에 사용한다면 제거하고 그렇지 않다면 plate에 그대로 둔다.

- 2 ~ 5mg/ml MTT 용액을 넣는다. (MTT 용액은 빛에 민감하므로 빛의 노출은 최소화)

- 37 ℃, 5%, CO2 incubator에 4시간 방치한다.

- MTT 용액을 제거 또는 제거하지 않은 채로 DMSO를 분주한다.

- 빛 차단한 상태에서 plate를 10 ~ 30분 동안 충분히 흔들어준다.

- Plate reader를 이용하여 흡광도를 측정한다. (파장: 500nm ~ 600nm)