강쌤의 실험 이야기 썸네일형 리스트형 미백 in vitro 효능평가 1. 세포주 및 세포배양 실험에 사용한 B16/F10 세포는 한국세포주은행 (KTCC, Seoul, Korea)에서 분양 받았으며, 100 units/ml penicilin/streptomycin과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Gibco, USA) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 3. MTT assay B16/F10 세포를 5x105cells/ml로 96 well에 분주하고 24시간 동안 안정화 시킨다. 시료를 농도별로 처리하고 24시간 동안 CO2 배양기에 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-Dimethylithiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazo.. 더보기 주름개선 in vitro 효능평가 1. 세포주 및 세포배양 실험에 사용한 HaCat 세포는 ATCC으로 부터 분양받았으며, 100 units/ml penicilin/streptomycin과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Gibco, USA) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 3. MTT assay HaCat 세포를 5x105cells/ml로 96 well에 분주하고 24시간 동안 안정화 시킨다. 시료를 농도별로 처리하고 24시간 동안 CO2 배양기에 배양하였다. 배양 후 MTT(0.5 mg/ml) 용액을 처리하고 4시간 동안 CO2 배양한 후 DMSO를 넣고 30분동안 37℃에서 방치한 후 540 nm 파.. 더보기 In vivo 항혈전작용 평가법 In vivo 항혈전작용 평가법 (Arterial Thrombosis Model Combined with bleeding time test) Method ①Rat의 몸무게를 재고 쥐의 무게에 맞춰서 마취제를 투여한다 (pentobarbital Na 60 ㎎/㎏을 복강 주사) -마취가 다 될 때 까지 기다린다.1) Rat을 종이테이프로 실험대에 고정하고 어깨선이 이어지는 목 부근을 절개한다(실험동안 열 발생 lamp를 이용하여 Rat의 체온이 37±0.5℃가 유지되도록 한다).2) Tracheotomy(기관절개)를 실시한다 (기도 확보).3) 가위로 작게 절개한 후 그 다음부터는 두 개의 forcep을 이용하여 근육을 찢어 들어가면서 좌측 경동맥을 조심스럽게 노출시킨다. 4) 혈관에 붙은 지방 조직을 제거.. 더보기 Cell Subculture protocol Cell Subculture protocol. Junchul 1. Remove and discard the spent cell culture media from the culture dish. 2. Wash cells using a SF media (approximately 2 mL per 10 cm2 culture surface area). Gently add wash solution to the side of the dish opposite the attached cell layer to avoid disturbing the cell layer, and rock the vessel back and forth several times. 3. Remove and discard the wash soluti.. 더보기 Mouse stereotaxic surgery Protocol Mouse stereotaxic surgery for injection 1. Measure weight of mice with balance to decide amount of anesthetics. 2. Prepare Ketamine/Xylazine in 1 cc syringe (28G ½) based on mice’s weight. a. Ketamine / Xylazine Mixture (Ketamine - 10 mg/ml, Xylazine - 1 mg/ml) - Ketamine - 100 mg/Kg dose, 10 mg/Kg dose 3. Put mice in isoflurane for about 5-10 seconds and take out 4. IP injection of Ket.. 더보기 LDH leakage Assay LDH leakage Assay 1) LDH (latate dehydrogenase) leakage assay원리 LDH assay는 젖산탈수소효소의 활성을 측정하는 시험법으로 빠르고, 간단하며 신뢰성이 높은 것이 특징이다. 젖산탈수소효소는 일반적으로 세포막을 통과하지 못하여 세포 밖으로 배출되지 않으나, 세포막이 손상되거나 세포가 죽는 경우 배 지 중으로 방출된다. 따라서 배지 중의 젖산탈수소효소 양은 치사 또는 상해를 입은 세포의 수와 비례하게 된다. 2) 시험방법 ① 실험재료 - 시판되고 있는 다양한 LDH Assay kit 중에서 선택 - 96well plate (flat bottom) ② 실험방법 - 96well plate에 각 well 당 세포 현탁액을 50 ~ 200㎕씩 분주한다. (대조군:.. 더보기 MTT assay MTT Assay 1) MTT assay원리 Tetrazolium-based colorimetric (MTT) 시험법은 많은 시료를 쉽게 빠르게 판독 할 수 있어 배양된 세포에서 세포 독성에 관한 연구에 주로 사용된 방법이다. 이 방법은 대사 과정이 온전한 세포의 미토콘드리아 내의 탈수소효소가 노란색 수용 성 tetrazoliumsalt[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT)를 비수용성의 짙은 자주색 MTT formazan 결정으로 환원시키는 원리를 이용한 것으로 적절한 파장 (주로 500 ~ 600nm)에서 흡광도를 측정하여 세포독 성을 평가할 수 있다.1),2) http://en.wikipedia.org/wiki/MTT.. 더보기 PCR Primer Design Guidelines PCR Primer Design Guidelines PCR (Polymerase Chain Reaction) Polymerase Chain Reaction is widely held as one of the most important inventions of the 20th century in molecular biology. Small amounts of the genetic material can now be amplified to be able to a identify, manipulate DNA, detect infectious organisms, including the viruses that cause AIDS, hepatitis, tuberculosis, detect genetic varia.. 더보기 이전 1 2 다음
